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影響到熒光顯微鏡成像效果的因素
點擊次數(shù):2909 更新時間:2019-06-20
     影響到熒光顯微鏡成像效果的因素
    影響熒光顯微鏡成像的熒光因素很多,主要包括:熒光樣品的制備,熒光光源的選擇,濾片轉(zhuǎn)盤的設(shè)計,熒光濾片的組合策略(激發(fā)光濾片,發(fā)射光濾片,雙色鏡分光濾片,帶寬選擇),顯微鏡物鏡種類,顯微鏡攝像系統(tǒng)的選擇等問題。熒光的激發(fā)、濾光、成像、淬滅,熒光實驗的調(diào)整就是怎么才能協(xié)調(diào)好以上因素得到好的效果,其中影響到成像效果的一個重要因素即是熒光光源。
    熒光顯微鏡的常用光源通常都是白光光源:高壓汞燈,氙燈,金屬鹵素?zé)艉蚻ed白光光源以及的led單波長光源。
    1、汞燈
    超高壓汞燈(50-200w),它是用石英玻璃制作,中間呈球形,內(nèi)充一定數(shù)量的汞,工作時由兩個電極間放電,引起汞蒸發(fā),球內(nèi)氣壓迅速升高,當(dāng)汞*蒸發(fā)時,可達(dá)50~70個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓力,這一過程一般約需5~15min。超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使汞分子不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結(jié)果。它發(fā)射很強的紫外和藍(lán)紫光,足以激發(fā)各類熒光物質(zhì),因此,為熒光顯微鏡普遍采用。推薦產(chǎn)品:歐司朗50w,103w,200w汞燈,適用于各大廠家熒光顯微鏡;一般200小時壽命
    2、氙燈
    氙燈和汞燈做為白光源,都能提供從紫外到近紅外一系列波長的光,但它們卻有著不同的激發(fā)光譜。汞燈集中在近紫外、藍(lán)光以及綠光附近,這種在峰值的高激發(fā)能量確保產(chǎn)生明亮的熒光信號,但光毒性卻很強。因此,hbo用來對固定樣品或弱熒光成像。相比而言,氙燈光源的激發(fā)比較平緩,可以用于不同波長間強度的比較,例如用于鈣離子濃度測量等。氙燈的強激發(fā)在近紅外800-1000nm。
    3、金屬鹵素?zé)?/div>
    目前各大顯微鏡品牌廣泛使用的一種光源,它和汞燈的激發(fā)光譜很像,但它和顯微鏡以光纖相連,能散熱,壽命更長。光纖從光源連到顯微鏡上,可以大量減少光產(chǎn)生的熱能。金屬鹵素?zé)魧罴?xì)胞成像的另一個優(yōu)勢是內(nèi)置強度設(shè)計裝置,可以容易調(diào)節(jié)激發(fā)光。也可以通過選擇直接連接獲得更好的激發(fā)效果。
    4、led白光熒光光源:這種光源的開關(guān)在毫秒間,減少樣品在光照下的暴露時間,延長壽命。另外,led光的衰減即快又,長期活細(xì)胞試驗下可大大減少光毒性。和白光相比,led僅僅在一個較窄的光譜激發(fā),多個led波段使得led光源能為多色熒光提供應(yīng)用。
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