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熒光顯微鏡的幾種熒光光源
點擊次數(shù):1501 更新時間:2017-05-17
   熒光顯微鏡的幾種熒光光源
  熒光顯微鏡是細胞生物學的基本工具。它是由光源、濾色片和光學系統(tǒng)等主要部件組成。是利用一定波長的光激發(fā)標本發(fā)射熒光,通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大觀察標本的熒光圖像而實現(xiàn)對熒光樣品的定性定量研究。
  激發(fā)、濾光、成像、淬滅,熒光實驗的調(diào)整就是怎么才能協(xié)調(diào)好以上因素得到的效果,一個常被忽視的方面是光源的使用,熒光顯微鏡的常用光源都是白光光源:高壓汞燈和氙燈,現(xiàn)在還新出了金屬鹵素燈和LED。
  1、汞燈
  超高壓汞燈(50-200W),它是用石英玻璃制作,中間呈球形,內(nèi)充一定數(shù)量的汞,工作時由兩個電極間放電,引起水銀蒸發(fā),球內(nèi)氣壓迅速升高,當水銀*蒸發(fā)時,可達50~70個標準大氣壓力,這一過程一般約需5~15min。超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結(jié)果。它發(fā)射很強的紫外和藍紫光,足以激發(fā)各類熒光物質(zhì),因此,為熒光顯微鏡普遍采用。
  2、氙燈
  氙燈和汞燈做為白光源,都能提供從紫外到近紅外一系列波長的光,但它們卻有著不同的激發(fā)光譜。汞燈集中在近紫外、藍光以及綠光附近,這種在峰值的高激發(fā)能量確保產(chǎn)生明亮的熒光信號,但光毒性卻很強。因此,HBO用來對固定樣品或弱熒光成像。相比而言,氙燈光源的激發(fā)比較平緩,可以用于不同波長間強度的比較,例如用于鈣離子濃度測量等。氙燈的強激發(fā)在近紅外800-1000nm。
  3、金屬鹵素燈
  這是近年來出現(xiàn)的一種光源,它和汞燈的激發(fā)光譜很像,但它和顯微鏡以光纖相連,能散熱,壽命更長。光纖從光源連到顯微鏡上,可以大量減少光產(chǎn)生的熱能。金屬鹵素燈對活細胞成像的另一個優(yōu)勢是內(nèi)置強度設計裝置,可以容易調(diào)節(jié)激發(fā)光。
  4、近來,還出現(xiàn)了一種新的熒光光源:LED,這種光源的開關(guān)在毫秒間,減少樣品在光照下的暴露時間,延長壽命。另外,LED光的衰減即快又,長期活細胞試驗下可大大減少光毒性。和白光相比,LED僅僅在一個較窄的光譜激發(fā),多個LED波段使得LED光源能為多色熒光提供應用。
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